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酶联免疫吸附法ELISA检测核小体
作者:南京金益柏生物科技有限公司    发布于:2016-06-14 09:53:42    文字:【】【】【
摘要:酶联免疫吸附法ELISA检测核小体中核小体是由DNA和组蛋白形成的染色质基本结构单位。每个核小体由147bp的DNA缠绕组蛋白八聚体近两圈形成。核小体核心颗粒之间通过60bp左右的连接DNA相连。核小体的形状类似一个扁平的碟子或一个圆柱体。染色质就是由一连串的核小体所组成。当一连串核小体呈螺旋状排列构成纤丝状时,DNA的压缩包装比约为40。纤丝本身再进一步压缩后,成为常染色质的状态时,DNA的压缩包装比约为1000。有丝分裂时染色质进一步压缩为染色体,压缩包装比高达8400,即只有伸展状态时长度的万分之一。

酶联免疫吸附法ELISA检测核小体核小体是由DNA和组蛋白形成的染色质基本结构单位。每个核小体由147bpDNA缠绕组蛋白八聚体近两圈形成。核小体核心颗粒之间通过60bp左右的连接DNA相连。核小体的形状类似一个扁平的碟子或一个圆柱体。染色质就是由一连串的核小体所组成。当一连串核小体呈螺旋状排列构成纤丝状时,DNA的压缩包装比约为40。纤丝本身再进一步压缩后,成为常染色质的状态时,DNA的压缩包装比约为1000有丝分裂时染色质进一步压缩为染色体,压缩包装比高达8400,即只有伸展状态时长度的万分之一。  

凋亡细胞的DNA断裂使细胞质内出现核小体。核小体由组蛋白及其伴随的DNA片断组成,可由ELISA法检测。

 

 

1.原理

人们接着用化学交联、高盐分离组蛋白,以及X衍射等方法进一步研究组蛋白多聚体的结构、排列以及怎样和DNA结合的,从而建立了核小体模型。1984KlugButler进行了修正。每一个核小体结合的DNA总量为200bp左右,一般在150~250变化范围(micrococcal nuclease)轻微消解染色质而得知的。连接两个核小体的链接DNA(linker
DNA)
是最容易受到这种酶的作用,因此
球菌核酸酶在连接DNA处被切断,此时每个重复单位的DNA长约200bp,而且是和五种蛋白相结合,保持着核小体的结构。也就是绳珠结构的绳被切断,剩下一个一个的

 

2.检测步骤

1、将凋亡细胞裂解后高速离心,其上清液中含有核小体;2、在微定量板上吸附组蛋白体’

3、加上清夜使抗组蛋白抗体与核小体上的组蛋白结合

4、加辣过氧化物酶标记的抗DNA抗体使之与核小体上的DNA结合

5、加酶的底物,测光吸收制。

 

3.酶联免疫吸附法ELISA检测核小体用途

该法敏感性高,可检测5*100/ml个凋亡细胞。可用于人、大鼠、小鼠的凋亡检测。该法不需要特殊仪器,适合基层工作,但是不能精确测定凋亡细胞发生的绝多对量。流式细胞仪定量分析

 

4.检测原理

细胞发生凋亡时,其细胞膜的通透性也增加,但是其程度介于正常细胞与坏死细胞之间。利用这一特点,被检测细胞悬液用荧光素染色,利用流式细胞仪测量细胞悬液中细胞荧光强度来区分正常细胞、坏死细胞核凋亡细胞。


5.应用价值

流式细胞仪检测具有以下特点:

1)、检测的细胞数量大,因此其反映群体细胞的凋亡状态比较准确

2)、可以做许多相关性分析

3)、结合被检测细胞的DNA含量的分析,可确定凋亡的细胞所处的细胞周期

 

酶联免疫吸附法ELISA检测核小体操作过程中要细心去操作,过程繁琐一定要有相应的耐心。

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