动物高灵敏ELISA实验基本规范
摘要：动物高灵敏ELISA实验基本规范麻醉下采血、心脏采血、眼眶静脉丛采血、腹主动脉采血、大鼠静脉注射操作、上药方法、大鼠局部给药、动物解剖
动物高灵敏ELISA实验基本规范之基本要点
1、一定要善待实验动物，因为它们为了生命科学献出了自己的生命。
2、在它们不听话的时候要适当用力但不要过度。
3、加强解剖人员对人兽共患病的认识。所有参加解剖人员都应配备相应的工作服、手套、帽、口罩等。不慎割破皮肤，应让血流出，流水冲洗，然后涂碘酊。如怀疑有感染，应采取相应措施，不能大意，避免不必要的伤害。
4、解剖完成后，为了消除粪便和尸腐臭味，可先用2‰高锰酸钾浸洗1～2分钟，然后用1‰～5‰新洁尔灭液褪去褐色后，用清水冲洗。
5、动物尸体不得随意处理，肉尸和内脏严禁食用，未经处理的皮毛等物也不得利用，防止不必要的疾病传播。解剖后动物尸体一定要放入指定冰箱统一处理。
6、发表文献时不要使用kill这类的单词，而是使用sacrifice。
7、要有批号及生产许可证号。
8、进行一次动物实验就尽量做好好收集数据，观察记录详认真细，处死后的动物应广泛取材称重并保存。
9、长期实验要将实验动物进行编号，打耳孔也要防止长好，苦味酸要经常补。
动物高灵敏ELISA实验基本规范之麻醉下采血
1准备
1.1如采用吸入麻醉时需准备一只25ml的量杯，取适量药棉塞于量杯底部。
1.2小心地取出麻醉所需用品。因麻醉所需用品在空气中高度易燃，并较空气重，麻醉所需用品作用会明显影响试验者的工作，所以采血室应通风良好，禁止明火燃烧，一旦发现试验者有轻微的昏沉、疲乏或操作不力等现象，应立即到空气新鲜的环境中去。
1.3将麻醉所需用品倒入量杯中的药棉上，使全部药棉湿透，但容器内不要有多余的麻醉所需用品液体存留。
1.4盖好麻醉所需用品瓶盖，并将该量杯倒扣在桌面上以减少麻醉所需用品在空气中挥发。
2麻醉
2.1按采血序号，选出采血的大鼠，并核对大鼠的编号。
2.2按常规方法捉住大鼠，将鼠头伸入加入乙醚的量杯中，注意要让适量的新鲜空气进入量杯以免动物窒息。
2.3观察大鼠的麻醉症状，当大鼠活动消失、呼吸变慢、稳而深时即可进行采血。
动物高灵敏ELISA实验基本规范之眼眶静脉丛采血
1眼眶静脉丛采血此法采血需一名操作者和一名助手
2选择一根尖端平齐，约3-4cm长的毛细管。
3操作者左手握紧大鼠颈部皮肤使鼠眼球鼓出，右手将毛细吸管插入内侧的眼睑和眼球之间以后轻轻旋转吸管以刺破眼眶的静脉丛。
4操作者轻轻转动毛细管，让血流入助手所拿的血样管内，血样管中可按需要加或不加抗凝剂，采血量按需要而定。
5采血完毕后操作者立即从眼内抽出毛细管，助手同时用干棉球压住眼睑，持续轻压约10秒钟。释放大鼠，用棉球揩去残留的血迹，如流血不止，则再加压。
动物高灵敏ELISA实验基本规范之心脏采血
1将麻醉大鼠仰卧，头部在操作者的远端。
2操作者用剪刀剪去心胸前区的毛，用酒精棉球消毒穿刺部位。
3取适当大小的注射器（用7#注射针）驱走注射器内空气，将针头插入动物左侧第3-4肋间心博动最强处。
4操作者一只手慢慢抽动注射器的针芯，另一只手轻搁在大鼠的胸腔上稳固地握住注射器的底部。
5如此时没有血液流入注射器中则停止回抽针芯，将针头再插入或抽出一点，直到血液流入注射器为止。
6当已经得到需要的血量时抽出注射针，取下注射器上的注射针，将血液用针芯推入采血管。
动物高灵敏ELISA实验基本规范之腹主动脉采血
1麻醉大鼠仰卧，沿腹中线打开腹腔。
2分离出腹主动脉，尽可能游离出一段较长的腹主动脉，用二把止血钳钳紧该动脉段的下端，在二止血钳中间剪断动脉，用上方的止血钳将动脉段伸入采血管的口内，用眼科剪刀在止血钳上方剪一斜口，（注意不要剪断动脉）血即可从切口喷入采血管。
3将此法采血后的动物死亡或处死。
动物高灵敏ELISA实验基本规范之大鼠静脉注射操作
1大鼠尾部共有四条血管，经静脉给药常用的血管是大鼠尾部背侧和腹侧的静脉。
2为使给药动物的尾静脉扩张，可将动物尾巴放于37?40℃水浴中，时间3?5分钟。
3核对大鼠标号，然后放入有机玻璃锥形筒内，使尾巴伸出以便注射。
4根据背侧和腹侧尾静脉的扩张程度，静脉的通畅与否，及注射的次数等选择静脉的进针点。一般首次注射应接近尾尖，不会因注射后产生血栓引起整条静脉阻塞。
5用手握住大鼠尾尖部，针头成一定角度插入静脉。
6回抽针芯，当有血流回入注射器时，即注射针已进入静脉，这时慢而稳地推动针芯直到注射完毕。
7拔出注射针后在穿剌的部位用干棉球压紧，直至出血停止。
动物高灵敏ELISA实验基本规范之上药方法
1由一助手固定动物，大拇指和食指握住动物的肩膀部位，并用另一只手的大拇指和食指握在动物的臀部。此时，动物肢体的活动轻度受限。
2应用一只注射器作为敷药器均匀地涂敷所需药量于脱毛区。
3药物涂敷后仍握住动物，直到给药区域在冷空气干燥器的空气流下维持5分钟干燥为止。
4正方形铝箔盖在给药部位上，并用绷带环绕动物的腹部，以固定铝箔在给药部位上。
动物高灵敏ELISA实验基本规范之大鼠局部给药
1在上药前一天，提前用剃去大鼠背上的毛，操作时必须仔细以避免试验组的动物皮肤受到任何擦伤或损害，剃毛面积为（5cm×5cm），部分可延伸至腹部的皮肤。用直径为4cm的圆形线板在背部的中心处标出圆形给药区域（12.5cm2）。
2准备4.0cm×4.0cm的正方形铝箔。准备防水的粘胶带（5cm×15cm）。
动物高灵敏ELISA实验基本规范之动物解剖
观察动物的大体情况与体表情况，营养是否良好；毛色是否正常；巩膜有否黄染；有无肿块、畸形；皮肤有无破溃、外伤。
1头颈
1.1实验动物的头颅上仰，沿颈正中线切开皮肤。在下颌骨内侧可找到颈浅淋巴结及颌下腺。
1.2从下颌骨正中沿下颌骨向左、右后切，使舌底软组织与硬骨分开。从口腔中用手术刀切断软硬腭交界，继而切断后壁。剥离与咽、气管、食管外侧相连的软组织及与颈椎相连之组织，拉下舌与气管等，直达胸腔上口为止。
2胸腔：
2.1开胸：剪开皮肤至两侧腋中线，检查乳腺腋窝淋巴结；剪断两侧肋骨和胸骨，注意分离胸腺与胸骨。
2.2沿食管后壁向下分离，气管、食管、甲状腺等留与心、肺、胸腺联在一起取出后分离。
3腹腔：
3.1开腹：沿正中线剪开皮肤和肌肉，剖开腹腔。
3.2器官取出顺序：脾、肝和胆囊、胃肠加上胰腺及肠系膜淋巴结、肾上腺、肾、腹主动脉。
3.3肾上腺：肾上腺较小并可能与肝下缘紧密结合，取材时要小心，不要伤及组织。
3.4泌尿和生殖器官取出。
3.5锯开颅骨，去除颅顶骨，用刀背轻轻将脑从颅底分出，依次切断各对脑神经，借脑本身的重量从颅内脱出，从颈髓下端切断。小心从蝶鞍槽内剥离与脑垂体相连的周围组织，取出。
3.6股二头肌与坐骨神经：自大腿的背侧1/3以下切开皮肤及股二头肌可见坐骨神经，肌肉和神经一起取材一块。
3.7注射部位：清理毛发后，在针眼处连带皮肤、皮下组织、血管取材一块。
动物高灵敏ELISA实验基本规范最重要部分并不是这些操作要点而是一定要善待这些为生命科学献出生命的小动物。
1、一定要善待实验动物，因为它们为了生命科学献出了自己的生命。
2、在它们不听话的时候要适当用力但不要过度。
3、加强解剖人员对人兽共患病的认识。所有参加解剖人员都应配备相应的工作服、手套、帽、口罩等。不慎割破皮肤，应让血流出，流水冲洗，然后涂碘酊。如怀疑有感染，应采取相应措施，不能大意，避免不必要的伤害。
4、解剖完成后，为了消除粪便和尸腐臭味，可先用2‰高锰酸钾浸洗1～2分钟，然后用1‰～5‰新洁尔灭液褪去褐色后，用清水冲洗。
5、动物尸体不得随意处理，肉尸和内脏严禁食用，未经处理的皮毛等物也不得利用，防止不必要的疾病传播。解剖后动物尸体一定要放入指定冰箱统一处理。
6、发表文献时不要使用kill这类的单词，而是使用sacrifice。
7、要有批号及生产许可证号。
8、进行一次动物实验就尽量做好好收集数据，观察记录详认真细，处死后的动物应广泛取材称重并保存。
9、长期实验要将实验动物进行编号，打耳孔也要防止长好，苦味酸要经常补。
动物高灵敏ELISA实验基本规范之麻醉下采血
1准备
1.1如采用吸入麻醉时需准备一只25ml的量杯，取适量药棉塞于量杯底部。
1.2小心地取出麻醉所需用品。因麻醉所需用品在空气中高度易燃，并较空气重，麻醉所需用品作用会明显影响试验者的工作，所以采血室应通风良好，禁止明火燃烧，一旦发现试验者有轻微的昏沉、疲乏或操作不力等现象，应立即到空气新鲜的环境中去。
1.3将麻醉所需用品倒入量杯中的药棉上，使全部药棉湿透，但容器内不要有多余的麻醉所需用品液体存留。
1.4盖好麻醉所需用品瓶盖，并将该量杯倒扣在桌面上以减少麻醉所需用品在空气中挥发。
2麻醉
2.1按采血序号，选出采血的大鼠，并核对大鼠的编号。
2.2按常规方法捉住大鼠，将鼠头伸入加入乙醚的量杯中，注意要让适量的新鲜空气进入量杯以免动物窒息。
2.3观察大鼠的麻醉症状，当大鼠活动消失、呼吸变慢、稳而深时即可进行采血。
动物高灵敏ELISA实验基本规范之眼眶静脉丛采血
1眼眶静脉丛采血此法采血需一名操作者和一名助手
2选择一根尖端平齐，约3-4cm长的毛细管。
3操作者左手握紧大鼠颈部皮肤使鼠眼球鼓出，右手将毛细吸管插入内侧的眼睑和眼球之间以后轻轻旋转吸管以刺破眼眶的静脉丛。
4操作者轻轻转动毛细管，让血流入助手所拿的血样管内，血样管中可按需要加或不加抗凝剂，采血量按需要而定。
5采血完毕后操作者立即从眼内抽出毛细管，助手同时用干棉球压住眼睑，持续轻压约10秒钟。释放大鼠，用棉球揩去残留的血迹，如流血不止，则再加压。
动物高灵敏ELISA实验基本规范之心脏采血
1将麻醉大鼠仰卧，头部在操作者的远端。
2操作者用剪刀剪去心胸前区的毛，用酒精棉球消毒穿刺部位。
3取适当大小的注射器（用7#注射针）驱走注射器内空气，将针头插入动物左侧第3-4肋间心博动最强处。
4操作者一只手慢慢抽动注射器的针芯，另一只手轻搁在大鼠的胸腔上稳固地握住注射器的底部。
5如此时没有血液流入注射器中则停止回抽针芯，将针头再插入或抽出一点，直到血液流入注射器为止。
6当已经得到需要的血量时抽出注射针，取下注射器上的注射针，将血液用针芯推入采血管。
动物高灵敏ELISA实验基本规范之腹主动脉采血
1麻醉大鼠仰卧，沿腹中线打开腹腔。
2分离出腹主动脉，尽可能游离出一段较长的腹主动脉，用二把止血钳钳紧该动脉段的下端，在二止血钳中间剪断动脉，用上方的止血钳将动脉段伸入采血管的口内，用眼科剪刀在止血钳上方剪一斜口，（注意不要剪断动脉）血即可从切口喷入采血管。
3将此法采血后的动物死亡或处死。
动物高灵敏ELISA实验基本规范之大鼠静脉注射操作
1大鼠尾部共有四条血管，经静脉给药常用的血管是大鼠尾部背侧和腹侧的静脉。
2为使给药动物的尾静脉扩张，可将动物尾巴放于37?40℃水浴中，时间3?5分钟。
3核对大鼠标号，然后放入有机玻璃锥形筒内，使尾巴伸出以便注射。
4根据背侧和腹侧尾静脉的扩张程度，静脉的通畅与否，及注射的次数等选择静脉的进针点。一般首次注射应接近尾尖，不会因注射后产生血栓引起整条静脉阻塞。
5用手握住大鼠尾尖部，针头成一定角度插入静脉。
6回抽针芯，当有血流回入注射器时，即注射针已进入静脉，这时慢而稳地推动针芯直到注射完毕。
7拔出注射针后在穿剌的部位用干棉球压紧，直至出血停止。
动物高灵敏ELISA实验基本规范之上药方法
1由一助手固定动物，大拇指和食指握住动物的肩膀部位，并用另一只手的大拇指和食指握在动物的臀部。此时，动物肢体的活动轻度受限。
2应用一只注射器作为敷药器均匀地涂敷所需药量于脱毛区。
3药物涂敷后仍握住动物，直到给药区域在冷空气干燥器的空气流下维持5分钟干燥为止。
4正方形铝箔盖在给药部位上，并用绷带环绕动物的腹部，以固定铝箔在给药部位上。
动物高灵敏ELISA实验基本规范之大鼠局部给药
1在上药前一天，提前用剃去大鼠背上的毛，操作时必须仔细以避免试验组的动物皮肤受到任何擦伤或损害，剃毛面积为（5cm×5cm），部分可延伸至腹部的皮肤。用直径为4cm的圆形线板在背部的中心处标出圆形给药区域（12.5cm2）。
2准备4.0cm×4.0cm的正方形铝箔。准备防水的粘胶带（5cm×15cm）。
动物高灵敏ELISA实验基本规范之动物解剖
观察动物的大体情况与体表情况，营养是否良好；毛色是否正常；巩膜有否黄染；有无肿块、畸形；皮肤有无破溃、外伤。
1头颈
1.1实验动物的头颅上仰，沿颈正中线切开皮肤。在下颌骨内侧可找到颈浅淋巴结及颌下腺。
1.2从下颌骨正中沿下颌骨向左、右后切，使舌底软组织与硬骨分开。从口腔中用手术刀切断软硬腭交界，继而切断后壁。剥离与咽、气管、食管外侧相连的软组织及与颈椎相连之组织，拉下舌与气管等，直达胸腔上口为止。
2胸腔：
2.1开胸：剪开皮肤至两侧腋中线，检查乳腺腋窝淋巴结；剪断两侧肋骨和胸骨，注意分离胸腺与胸骨。
2.2沿食管后壁向下分离，气管、食管、甲状腺等留与心、肺、胸腺联在一起取出后分离。
3腹腔：
3.1开腹：沿正中线剪开皮肤和肌肉，剖开腹腔。
3.2器官取出顺序：脾、肝和胆囊、胃肠加上胰腺及肠系膜淋巴结、肾上腺、肾、腹主动脉。
3.3肾上腺：肾上腺较小并可能与肝下缘紧密结合，取材时要小心，不要伤及组织。
3.4泌尿和生殖器官取出。
3.5锯开颅骨，去除颅顶骨，用刀背轻轻将脑从颅底分出，依次切断各对脑神经，借脑本身的重量从颅内脱出，从颈髓下端切断。小心从蝶鞍槽内剥离与脑垂体相连的周围组织，取出。
3.6股二头肌与坐骨神经：自大腿的背侧1/3以下切开皮肤及股二头肌可见坐骨神经，肌肉和神经一起取材一块。
3.7注射部位：清理毛发后，在针眼处连带皮肤、皮下组织、血管取材一块。
动物高灵敏ELISA实验基本规范最重要部分并不是这些操作要点而是一定要善待这些为生命科学献出生命的小动物。
将本文加入收藏夹
