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如何拯救被污染细胞
作者:南京金益柏生物科技有限公司    发布于:2016-07-01 09:11:05    文字:【】【】【
摘要:洁净区不是完全没有细菌,只是细菌的数量相对较少,国家标准100级的洁净标准是浮游菌数不得超过5个每立方米,沉降菌数不得超过1个每培养皿.而国外的标准比我国的还要高一点,要求的数量更少。 所以在我们的洁净操作台里,并不是真正一个细菌都没有的,所以在操作的时候还是要尽量利索迅速地完成操作。这样可以有效减少进入培养体系细菌的数量。

如何拯救被污染细胞首先需要了解洁净区不是完全没有细菌是细菌的数量相对较少,国家标准100级的洁净标准是浮游菌数不得超过5个每立方米,沉降菌数不得超过1个每培养皿.而国外的标准比我国的还要高一点,要求的数量更少。 所以在我们的洁净操作台里,并不是真正一个细菌都没有的,所以在操作的时候还是要尽量利索迅速地完成操作。这样可以有效减少进入培养体系细菌的数量。

所以处理细菌污染的重要原则就是:无限地稀释细菌的浓度,无限地减少细菌的数量。操作步骤如下

1.将污染的培养液倒掉,转烧瓶口,加入10mlPBS,适当晃动清洗培养瓶,然后倒掉。转烧瓶口。

2.继续加入10mlPBS,同样方法晃动,清洗培养瓶,然后倒掉。

3.继续加入5mlPBS,同样方法洗瓶,主要是培养面,然后倒掉。

4.重复步骤3再洗。

5.重复步骤3再洗。

6.加入3-5ml双抗,洗瓶,静置3-5分钟,然后吸出。

7.加入3ml双抗,洗瓶,静置3-5分钟,然后吸出。

8.再加入5mlPBS洗瓶,然后吸出。

9.加入10ml培养液,加入2ml双抗,放置培养箱培养,5小时之后,倒掉培养基,加入PBS洗瓶两次,然后加入胰酶消化,吹打后置于离心机800-1000r/min离心,然后洗一次。置于新的培养瓶里培养,培养体系加入2ml双抗。

10.24h之后,视情况换液,若仍然污染严重,培养基浑浊,重复以上步骤,若看不到污染物,则继续步骤1)3)、4)、6)、8),然后加入培养液培养,培养体系加入2ml双抗.

11).24h之后,若仍污染严重,可再重复一次,若还污染只能弃之(不过一般没有出现这种情况),若镜下不见污染物,则换液PBS洗瓶,正常培养。

 

如何拯救被污染细胞以上是对于细菌污染(常见为金黄色葡萄球菌和大肠杆菌);若为霉菌或者真菌污染,加入两性霉素B清洗和培养,终浓度一般为2.5μg/ml(在30μg/ml时会有细胞毒性)。另外也可以选择在培养基里加3ug/ml的制霉菌素或放线菌素D 其它操作同;若为支原体或者黑胶虫污染,因为这个太难处理。有专门针对黑胶虫和支原体污染的试剂的,因为价格昂贵 建议重新培养细胞

 

以上方法主要是针对贴壁生长的细胞,在操作的过程中,一定要小心操作动作,轻柔缓慢,切忌粗心大意。防止细胞脱落。以上方法操作得当,基本上都能救活你的细胞。当然如果你的细胞仍有富余或者冻存的,建议把污染的扔掉,再复苏更加方便。如何拯救被污染细胞这个拯救细胞还是主要针对你就只剩这一瓶细胞无路可退的时候。

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