怎样检测细胞凋亡中细胞凋亡（apoptosis）指为维持内环境稳定，由基因控制的细胞自主的有序的死亡。细胞凋亡与细胞坏死不同，细胞凋亡不是一件被动的过程，而是主动过程，它涉及一系列基因的激活、表达以及调控等的作用，它并不是病理条件下，自体损伤的一种现象，而是为更好地适应生存环境而主动争取的一种死亡过程。
（一）细胞凋亡
人体内的细胞注定是要死亡的，有些死亡是生理性的，有些死亡则是病理性的，有关细胞死亡过程的研究，已成为生物学、医学研究的一个热点。人们已经知道细胞的死亡起码有两种方式，即细胞坏死与细胞凋亡（apoptosis）。细胞坏死是早已被认识到的一种细胞死亡方式，而细胞凋亡则是逐渐被认识的一种细胞死亡方式。
细胞凋亡是细胞的一种基本生物学现象，在多细胞生物去除不需要的或异常的细胞中起着必要的作用。它在生物体的进化、内环境的稳定以及多个系统的发育中起着重要的作用。细胞凋亡不仅是一种特殊的细胞死亡类型，而且具有重要的生物学意义及复杂的分子生物学机制。
凋亡是多基因严格控制的过程。这些基因在种属之间非常保守，如Bcl-2家族、caspase家族、癌基因如C-myc、抑癌基因P53等，随着分子生物学技术的发展对多种细胞凋亡的过程有了相当的认识，但是迄今为止凋亡过程确切机制尚不完全清楚。而凋亡过程的紊乱可能与许多疾病的发生有直接或间接的关系。如肿瘤、自身免疫性疾病等，能够诱发细胞凋亡的因素很多，如射线、药物等。
人的部分生理结构属于自然凋亡，如人的有尾阶段，尾部在发育过程中自动凋亡。
（二）怎样检测细胞凋亡原理
细胞发生凋亡时，其细胞膜的通透性也增加，但其程度介于正常细胞和坏死细胞之间。利用这一特点，被检测细胞悬液用荧光素染色，利用流式细胞仪测量细胞悬液中荧光强度来区分正常细胞、坏死细胞和凋亡细胞。
（三）价值
流式细胞仪检测有下列特点：（1）检测的细胞数量大，因此其反映群体细胞的凋亡状态比较准确；（2）可用许多相关分析；（3）结合被测细胞DNA含量分析，可确定凋亡的细胞所处的细胞周期。但该法周样也具有标本制作复杂。非原位检测，不易与变性细胞鉴别等因素的限制。
1. 检测形态学及细胞膜完整性的Hoechs-PI双染色法
细胞发生凋亡时，其细胞膜的通透性也增加，但其程度介于正常细胞和坏死细胞之间，利用这一特点，被检测细胞悬液用荧光素染色，采用流式细胞仪测量细胞悬液中细胞荧光强度来区分正常细胞、坏死细胞和凋亡细胞。
常用Hoechs-PI染色法，正常细胞对染料有拒染性，荧光着色很浅，凋亡细胞主要摄取hoechs-PI染料，呈现强蓝色荧光，而坏死细胞主要摄取碘化丙啶（PI）而呈红色荧光。
2.DNA片段原位标记
凋亡细胞DNA片段原位末端检测技术是指在细胞（或组织）结构保持不变的情况下，用荧光素、地高辛或生物素标记的脱氧尿三磷酸（deoxyuridinetriphate,UDTP）和末端脱氧核苷酸转移酶（terminal deoxynucleotidy1 transferase,TdT）相反应与凋亡细胞裂解后3'的羟基（-OH）端相结合经显色反应后检测DNA裂解点的技术。
DNA片段原位标记法有两种：（1）原位缺口转移（in situ nick-translation,ISNT）技术，该技术是1994年由Fehsel等提出，它是利用DNA多聚酶I将标记的核苷酸接到断裂的3'-OH端；（2）原位缺口末端原位标记技术（in situ end labelling technique,ISEL）, 该技术即TUNEL法,于1993年由Wijsman等提出， 它是利用TdT将标记DUTP接到3'-OH端。研究证明，TUNEL的敏感性远高于尤其对早期凋亡的检出TUNEL更为适用。其原因可能是凋亡发生时DNA大多是双链同时断裂而单链断裂少见。ISNT是依赖DNA多聚酶I的单链修复反应，故阳性率较低。细胞凋亡时DNA断裂早于形态学改变及DNA含量减少。因此该法较前述各法具有更高的灵敏性，但环死细胞亦有DNA裂点形成。因此环死亦可呈TUNEL阳性反应。
3.检测细胞膜成分变化的Annexin V联合PI法
（1）检测原理：在细胞凋亡早期位于细胞膜内侧的磷脂酰丝氨酸（PS）迁移至细胞膜外侧。磷脂酰结合蛋白V（Annexin V）是一种钙依赖性的磷脂结合蛋白，它与PS具有高度的亲合力。因此，Annexin V可以作为控针检测暴露在细胞膜表面的PS。故利用对PS有高度亲和力的Annexin V, 将Annexin V标记上荧光素，同时结合PI拒染法进行凋亡细胞双染后用流式细胞仪即可检测凋亡细胞。
（2）结果判断：正常活细胞Annexin V、PI 均低染；凋亡细胞Annexin V 高染、PI低染；坏死细胞Annexin V、PI 均高染。
（3）应用价值：细胞发生凋亡时，膜上PS外露早于DNA断裂发生，因此Annexin V 联合检测早期细胞凋亡较TUNEL法更为灵敏。 又Annexin V 联全PI染色法不需固定细胞,可避免PI染色法因固定造成的细胞碎片过多及TUNEL法固定造成的DNA片段丢失。因此，Annexin V联合法PI更省时，怎样检测细胞凋亡结果亦更为可靠，是目前最为理想的检测细胞凋亡的方法。
