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关于细胞铺均匀的小技巧
作者:南京金益柏生物科技有限公司    发布于:2016-07-08 10:49:49    文字:【】【】【

细胞铺板大概是最常见的一个实验了。但是有很多才接触的同学缺少经验累积掌握不到要领,导致每次铺得不均匀: 要么中间密周围稀,要么周围密中间秃顶。今天分享一些小技巧来帮助大家。

1. 细胞要尽量打散,大部分呈单个状态。离心后,要充分悬浮。


2.放在水平板面上先上下移动,再左右移动,每个方向5到6次,但关键的是摇完后最好直接放入培养箱中,不要再做过多的运动,例如放到镜下去看,否则很容易就又聚到中间去了。


3. 如果实验室有平板振荡器的话,建议用振幅小,频率高的仪器稍振荡一下,效果不错

4. 般96孔板我每孔是加100微升细胞悬液,从孔的左边靠近底部加入,加完半边板后,将未加的细胞悬液混一下再,继续加剩余的半边板子,都加完后盖上盖子, 左手轻轻扶住板的左边,右手轻轻敲击板的右边缘,注意把握力度(我一般轻巧敲三下),太强或次数太多会导致细胞集中成堆,将板顺时针旋转(逆时针效果不好),依次敲击剩余三个边,静置约5分钟,放入37度培养箱。



6 孔 板12孔板或24孔板,我均采用将第一个孔加入少量无血清培养基,晃动浸润整个孔底,然后用移液枪吸至第二孔,同样方法浸润孔底,其它孔一次类推,这样整 个孔底都是湿润的,细胞悬液会平铺在整个孔底,加细胞悬液的时候可以避免加在中间中间细胞多,而加在周边晃匀后周边细胞多中间少的现象,细胞分散较均匀, 注意加完细胞悬液后要放工作台静置一下。这个方法就是有点慢,但操作熟练了也不慢。也可以采用轻拍的方式,但力度没有96孔板好掌握,效果没有96孔板 好,所以我放弃改用浸润孔底的方法。



5. 一瓶细胞长满后,正常处理,在培养瓶里吹匀,然后铺6孔板,每孔2毫升,铺完之后不用观察直接用酒精棉擦拭,然后放到培养箱里,轻微的左三圈右三圈 前三圈 后三圈。基本上24小时之后观察 每孔的细胞都会很均匀。

6.计算好所需要的全部液体量和细胞量,混匀后,加到六孔板里,六孔板按横8字型晃,显微镜下观察,如果不均匀,按上述方法再晃。如果细胞未计数直接种的话,在种六孔板的过程中,随时晃一下混匀用的瓶子,瓶子我通常是顺时针或逆时针转圈。


7.细胞悬液加完后,将细胞培养板抬高,对着灯光,从底部往上看,看细胞有没有抱团。然后从底部敲击,使之分散。


8.转移到六孔板后需要摇晃。摇晃过程时候注意最好不要让那个细胞液转圈,不然细胞就全被带到中间去了导致不均匀。

 

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