定t转移/免疫印迹解析要点从凝胶上把大分子量和小分子量的所有蛋白质全部都转移下来一般是困难的。这过许需要试验不同浓度的凝胶以获得目标蛋白的有效转移。延长转移时间一般不会炸加蛋白质转移量。在转移缓冲液中使用低浓度SDS也许有益。当在评价转移条件时包括第二种用普通蛋白质作背景并染色(例如，使用硝化纤维膜并染色)。在免疫印迹中获得一个好的信噪比所面临的最大问题是高背景。这个间题可用许鉴办法解决(Harlowand one 1988):
一使用不同的阻断缓冲液

一进一步滴定起始和次级抗体
一减少杭体孵化次数

一在每一步用l %NP-40 ,0.5 % doC , 0 . I % sds ,  150mmol/LNaCI和50mmol, 'Tris(pI-I'7 . 5 )冲洗印染膜

一抗体孵化过程中加人1%v NP40  

一增加每次冲洗时间

一检查阻断荆配制是否正确

一确保所有容器及印染设备是干净的

其他可能遇到的问题可能来自于膜的损坏(如折皱或压皱)，或膜处理不当(使用非齿形边的镊子并不戴手套)。