l)准备溶液:
 PBS
 RSB-8 lOmmol/L Tris;10mmol/L, NaCI, 8mmol/L乙酸镁，pH7.4
RSB 10mmol/L Tris;  lOmmol/L NaCI，1.5 mmol/ L乙酸镁，pH7.2
0.88mol/L,蔗糖，S . }mmolf L乙酸镁
3)用NKM悬浮搅碎的组织;最终体积大约为850一900ml。在一500-inl的离心管中4500g离心10分钟。用NKM溶液洗两次。
4)称取洗过的沉淀的重量，悬浮于100ml含2 .2mn/L蔗糖甲IOnnrnollL M薛12或乙酸镁
  的溶液(约]OOmII 1008起始组织)中二用带紧密结合Teflon研棒，马达推动的
  Potter-}1ve}tje。匀浆器匀浆IO一I2次。
5)将匀浆用含M扩‘的2 _ 2mo1}L蔗糖溶液稀释至肝脏沉淀重量的10倍;例如、肝脏为
  I50},蔗糖悬液的终体积就是is仪玩d}
6)先后用一层和两层粗孔滤纸过滤匀浆。
7)过滤后的匀浆}0 000离心z小时。
8)用一干净的刮刀刮下沉淀(一些细胞核会附在管壁上，一并刮下)。用一紧密结合
  Teflon-玻璃匀浆器匀浆使之溶于含5mmol/L 的0.88mol/L蔗糖溶液中(1ml/g组
  织)、2500g离心20分钟。，
9)从细胞核沉淀中分离细胞核或核仁。
分离细胞核
a.沉淀重悬浮于含5mmol/L的0.34mol/L蔗糖溶液中
b.下面加一层0.88mol/I.蔗糖溶液。
c.2500g离心20分钟
制备核仁
a.将第8步中得到的沉淀以每克组织0.3m1的体积重悬浮于含5mmol/L的0.34mol/L蔗糖溶液中。
b.用一冰水冷却的菊花状振荡头进行超声处理。
c.每10秒钟超声处理后进行10到20秒的冷却间隔，监测细胞核的破碎情况。总的超声处理时间大约60到120秒。
10)超声处理物从振荡头中取出放进一Sl}}rril的塑料离心管中。
11)75g离心4分钟澄清超声处理物。
12}取出上清放到干净的离心管中。
13)下面加一层无的0.88mol/L蔗糖溶液，2500g离心20分钟。
14)吸出上清。