介导大分子进入胞浆
下述利用脂质体孵育介导大分子进人胞内的方法
1)种子细胞在细胞培养板孵箱培养过夜或细胞长到50%一70%的平板密度板密度
2)用无血清培养基洗一次细胞,Ph8
3)用最小体积的无血清培养基稀样包裹了大分了的}r}敏感的脂质体,并将其加人细胞中
最小体积:
10mm培养皿 7.2ml
60mm培养皿3.2 ml
33mm培养皿 800ul
6孔板 800ul
12孔板800ul
24孔板800ul
48孔板100ul
96孔板50ul
4)孵育2一8小时。
5)洗细胞并分析大分子的摄人或研究生物活性
介导大分子进入胞浆注意事项
pH敏感的脂质体与血清接触会导致其内容物泄漏或使其失去融合活性,应避免接触血清,脂质体也应避免与低pH 、高离子强度或含二价离子接触。
在某些实验中,在脂质体表面籁附有细胞特异性靶配体时可以大大提高细胞摄人脂质体的能力,这些配体可以是单克隆抗体、转铁蛋自、半乳糖和叶酸
如果是悬浮培养,可以将用最小体积无血清培养基稀释的脂质体加人到聚苯乙烯细胞培养管中与细胞孵育
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