在显微载玻片上怎么样固定活细胞？具体步骤是什么注意事项又是什么呢？

1)制备VALAP贮存液(凡士林:羊毛脂:石蜡，1:1:1混合)，用来密封盖玻片。将混合物在一热平板上以中低温熔化。蜡状混合物在载玻片上应平滑地铺展并迅速凝因。如果凝固太快则多加些凡卜林和羊毛脂，如果凝固太慢则多加些石蜡。

2)活细胞标记后，固定在PBS(+)中的盖玻片上。当将含有活细胞的盖玻片固定到显微载玻片时，为了避免挤压细胞应使用Parafilm膜隔离。将窄条Parafilm膜置于载玻片上，其距离使得盖玻片的两边跨在Parafilm膜上，这样可以起到物理隔离的作用。用熔化的VALAP将盖玻片的边沿密封。这样可使细胞（相关阅读体外培养细胞的分型）相互粘连及附着于底物如果细胞处不含培养基质中,，细胞会变圆并脱离盖玻片。
注意事项
1)已固定的细胞固定在载玻片时不需要物理隔离。
2)使用DMEM和BME等含有酚红的培养基时应小心，因为酚红也是荧光剂，能对荧光信号产生于扰。