1)按免疫过氧化物酶实验方案中的步骤操作。

2)与经过亲和层析纯化的、用PBS(pH 7.4 ) 1: 50稀释的碱性磷酸酶偶联的二抗室温 孵育1小时，反应在潮湿仓里进行。

3)用PBS洗3次，每次5分钟

4)在室温用缓冲液1洗2次，每次15分钟，随后在缓冲液2中室温平衡1分钟。

5)将细胞与2ml BCIP/NBT孵育，室温振荡显色。底物液在便用前配制。反应产物呈黑/紫色。

6)定时用倒置显微镜检查显色情况。通常的温育时间可以从5分钟到2小时。

7)用含有20 mmol/L EDTA的PBS冲洗以终止反应。现在可将盖玻片封固进行光学显微镜观察