下面所述的在培养细胞上进行的间接免疫荧光实验方法对大多数不同细胞骨架TF类型以及核IF系统、核纤层蛋白效果都很好。
1)在35mm直径的塑料培养皿里用1号或1.5号玻璃盖玻片在生长培养基中生长细胞直到大约50%汇合度。
2)在固定前，用珠宝镊子取出盖玻片。仔细握住盖玻片并将其放入含PBS的烧杯里洗三次。将盖玻片的边缘挨到一片Whatrnan I号滤纸上吸干PBS,将大多数液体除去是很重要的，但不要让它在空气中干燥。这一步及下面的每一步中始终知道细胞在盖玻片的哪一面也是很重要的
3)用珠宝镊子迅速将潮湿的盖玻片投入到含有预冷纯甲醇的哥伦比亚盖玻片染色罐里。这一步应该在防爆冰箱的冷冻室里进行(由于甲醇的易挥发性)。快速关紧冰箱门。让细胞固定5分钟。使用无水纯甲醇是很重要的，以便在冰箱的冷冻室里在分子筛上贮存甲醇的贮存液，在染色罐里经常换甲醇以使在固定过程中最少的出水也是十分重要的。
4)取出盖玻片，当它还湿润时，快速把它转移到另一个含有PBS的染色罐里，在室温放置3分钟。
5)取出盖玻片，将它的边缘放在滤纸上吸干大部分PBS。立即在培养皿里将其放在一片潮湿的滤纸上(但不要浸没)。确定细胞面向上。在上面加上50-l00ul含5 % NGS (Sigma)的PBS封闭非特异结合位点，盖上盖37摄氏度温育20分钟。
6)用珠宝镊子取出盖玻片，在装有含0,05%吐温的PBS溶液的染色罐中洗3分钟。再只用PBS洗二次以上，每次3分钟。在最后洗涤之后，按照上述方法吸干额外的液体。
7)将盖玻片放在湿盒内并在细胞面上加上已经用PBS稀释的50一100ul的一抗(即抗波形蛋白的单克隆抗体，Sigma）如果盖玻片能保持潮湿，则抗体将会分布在盖玻片表面。盖好盖，并在37摄氏度温育20分钟。
8)按照上述的方法用PBS洗盖玻片三次，并用滤纸吸干额外的液体。
9)按照上述适用于一抗的方法，加50-100ul的二抗(即羊抗鼠IgG-FITC)。再按照上述适用于一抗的方法在37摄氏度温育。
10)按照上述方法洗盖玻片并吸干额外的液体。
11)用DABCO及Gelvetol在载玻片上固定盖玻片并在荧光显微镜下观察