含散在重复序列(IF5)单基因探针和染色体绘图探针的制备
当探针DIN A含有散在重复序列时,可采用染色体原位抑制(CJSS)杂交。这样可防止探针内的IRS与非靶分子序列结合,在探针混和物中加人竞争DNA进行预退火。竞争DNA叮以是总基因组DNA(如人胎盘DNA),大小平均为500核昔酸。另外,DNA中部分(商品化有人和鼠DNA)也能成为良好的竞争DNA,因为它富含工IRS
1}探针混和物制备如下:
a.按下表挑选合适探针,用吸管吸取所表明的相应量加到微星离心管内。
b.加人竞争DNA,当使用IRS-PCR扩增的探针DNA时,要加人>劝牛塔的qt },}}} 6
c.当加入大量场时,无需加入载体DNA对于不同的染色体绘图探针DNA,所需用量是不同的,决定于染色体靶分子的大小。
2)加人1/20体积的3mmol/L pH5.0,一80℃沉淀DNA至少30分钟。
3 )1000g离心10分钟,倒置倾去上清液。
4)在Eppendorf管内通过吸管吹打,用70%乙醇洗涤沉淀物。
5)按步骤3重复离心和洗涤一次。
6)通过在热块中37℃放置40分钟或在Savant真空离心机内离心较短时间使沉淀物干燥。
7)将干燥沉淀物悬浮在讨去离子甲酸胺溶液中,混匀至少30分钟。
8)加5ul杂交缓冲液,再次混合至少30分钟。
1}探针混和物制备如下:
a.按下表挑选合适探针,用吸管吸取所表明的相应量加到微星离心管内。
b.加人竞争DNA,当使用IRS-PCR扩增的探针DNA时,要加人>劝牛塔的qt },}}} 6
c.当加入大量场时,无需加入载体DNA对于不同的染色体绘图探针DNA,所需用量是不同的,决定于染色体靶分子的大小。
2)加人1/20体积的3mmol/L pH5.0,一80℃沉淀DNA至少30分钟。
3 )1000g离心10分钟,倒置倾去上清液。
4)在Eppendorf管内通过吸管吹打,用70%乙醇洗涤沉淀物。
5)按步骤3重复离心和洗涤一次。
6)通过在热块中37℃放置40分钟或在Savant真空离心机内离心较短时间使沉淀物干燥。
7)将干燥沉淀物悬浮在讨去离子甲酸胺溶液中,混匀至少30分钟。
8)加5ul杂交缓冲液,再次混合至少30分钟。
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