在探针加到标本前，三维保存的培养细胞在甲酞胺溶液中进行变性
1)载玻片在73℃变性缓冲液A中孵育3分钟，然后对不同的制品，所需时间可有所变动，但合适的变性时间范围窄。应通过实验加以确定。
 变性缓冲液A
2xSSC
用1mol/LHCI将pH调到7.0，加人50mmol/L磷酸钠以维持pH。
小心:甲酷胺;高浓度的酸和碱
由于DNA在73`C进行变性，应该考虑到，当载玻片放人变性液时，温度会下降，因此悔变性一块载玻片纽性液的温度应高出。任何时候，在一个Coplin瓶中不能放置四块以上载玻片

2)将载玻片放在含有变性缓冲液B的第二个Coplin瓶内，73`C孵育约1分钟

变性缓冲液B

2xSSC
用1mol/LHCl将pH调到7.0,加人50mmol/L磷酸钠以维pH。
3)从变性缓冲液B中取出载玻片，除待加人探针处外，擦净载玻片所有其他地方，甩去余留缓冲液，将载玻片慢慢放在含有探针液滴中心上方，液体扩散至整个盖玻片最后阶段尽可能快是非常重耍的。
4)用橡皮泥封闭盖玻片。