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用苏木素和曙红对组织切片染色
作者:南京金益柏生物科技有限公司    发布于:2016-08-05 08:40:07    文字:【】【】【
苏木素和曙红(H-E)染液作为组织学的染色剂已经使用了至少一个世纪,现在仍是一种基本的染液通过H-E染色不但能鉴别不同类型的组织,而且最终还能鉴别出组织的形态学改变,而这种形态学的改变是当代肿瘤诊断的基础。这种染液的配方使用多年而未经改变,是因为其与多种固定剂配合使用的效果极好,而且对显示细胞浆、细胞核和胞外基质等多种结构的形态的效果也极好。另外的两种染液—Giemsa染液和Papanicolaou染液,也有多种用途,前者尤其适用于风干固定的细胞的染色,而后者则为多层细胞的样品提供厂一种分辨清晰、精细的染色方法。对这两种染液的详细了解,读者可参考Sheehan和Hrapachuk(1980)及Carson(1991)的文章。
    苏木素呈深的蓝紫色,通过一种复杂而且目前仍不清楚的反应机制使核酸染色_曙红旱粉红色,能非特异地使蛋白质染色。在典型的组织中,细胞核被染成蓝色,而细胞浆和胞外基质则被染成不同程度的粉红色。固定效果好的细胞标本经染色后能提供出相当多的核内信息启经苏木素对细胞核染色,能显示出细胞的类型及肿瘤类型特异性的异染色质的浓缩形态,这对于诊断是非常重要的。核仁可被曙红染色。如果细胞浆中有大量的多聚核糖体存在,则会出现一种特殊的蓝斑。高尔基区可根据经验来鉴别出来,这一区域位于细胞核附近的无染色区。因此通过染色可揭示出大量的结构信息,这些结构信息带有特定的功能含义。
    苏木素染色的一个局限性是不能与免疫荧光配合使用,但对从同一组织制备出的连续石蜡切片进行免疫荧光检测时,叮用该染料对其中的一块切片进行染色,苏木素在多种使用生色底物(如碱性磷酸酶或辣根过氧化物酶)的免疫组化和杂交实验方案中还是一种非常有用的负染剂,此时通常不与曙红合用。
1)细胞或组织水化。取一张载玻片,玻片上带有冰冻切片或经酒精或者醛类固定剂固定并重新水化的组织切片,将载玻片浸人水中并振荡30秒:用水漂洗是重要的;苏木素能与盐和缓冲剂形成沉淀。苏木素染色可以在用非荧光检测系统进行的免疫组化或杂交反应后进行、
2)将载玻片放人一个盛有苏木素的Coplin广口瓶( Fisher Scientific)中,振荡30秒。Mayer's苏木素是使用最为方便的一种染液,能与大多数的生色底物配合使用。
3)用蒸馏水漂洗1分钟,此时可估计染色程度。如有必要可重复2, 3步骤
4)用曙红(曙红Y, 1%的水溶液,EM Diagnostic Systems)振荡染色10~3U秒)
5)分别在95%和100%的酒精中各浸泡两次,每次30秒,使组织切片脱水。乙醇、甲醇或Fiex酒精作脱水剂(Richard-Al]ar} Scientific,  ICalama-r}tro,   Michigan).小心:甲醇某此牛色底物会在酒精中溶解。如不能使用酒精,则用甘油或其他液体封固剂来固定盖玻片
6)过两遍二甲苯以除去酒精。
7)加一两滴封固液 ,盖上盖玻片。如使用塑料载玻片或在塑料培养皿中染色,则不能使用二甲苯或用乙甲苯配制的封固液。否则会溶解塑料

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