很多同学在做CHO悬浮细胞的转染实验却总是失败,下面来解答一下失败原因。细胞从有血清到无血清需要一个驯化的过程。在低血清时出现成团现象,说明细胞状态不是很好,最好在摇瓶或SPINER中培养。同时注意你的无血清培养基,需要添加些其他成分的。CHO表达抗体方面,您觉得是转染贴壁的CHO然后挑单克隆,筛选比较好还是CHODG44系统更好?转染贴壁的当然没有悬浮的CHODG44系统好,在工业上贴壁快要淘汰了吧。还有就是转染策略:是选择贴壁细胞转染、筛选成功之后再驯化成悬浮培养还是直接用CHO的悬浮细胞转染呢?另外,采用哪种方法转染效率高并且利用筛选到转入目标质粒的阳性细胞株呢?直接用CHO的悬浮细胞转染,目前流行的是电转染方式。
CHODG44细胞能不能稳转后不筛选单克隆和MTX加压,筛选培养基筛选后将混合克隆培养冻存,然后每次用时直接培养混合克隆,不知道这样是不是可行,是不是转进去的细胞会慢慢丢失?对于短期使用是可行的,培养时间稍微一长就不行了。不是转进去的细胞丢失了,因为加压培养时只有转染有抗性的细胞生长,但是并不是每个有抗性的细胞都表达目的蛋白的,时间一长培养的都是有抗性但不表达蛋白的细胞。
还有CHO表达抗体方面,您觉得是转染贴壁的CHO然后挑单克隆,筛选比较好还是CHODG44系统更好?转染贴壁的当然没有悬浮的CHODG44系统好,在工业上贴壁快要淘汰了吧。还有就是转染策略:是选择贴壁细胞转染、筛选成功之后再驯化成悬浮培养还是直接用CHO的悬浮细胞转染呢?另外,采用哪种方法转染效率高并且利用筛选到转入目标质粒的阳性细胞株呢?直接用CHO的悬浮细胞转染,目前流行的是电转染方式。