关于流式细胞术实验注意点
在做流失细胞实验时,需要注意以下几点。流式细胞仪当然可以检测细胞内蛋白,这一点,并不是很难,当然要比检测细胞表面抗原复杂些,好在都已经有现成的方法,不成问题。
不过流式的应用原理主要还是抗原和抗体反应和western、免疫组化没有本质差别,但是由于免疫组化和western都有酶催化底物的放大体系,因此,流式不适合检测低表达的蛋白,低表达的还是采用western(尤其是化学发光底物更佳)和免疫组化更好。当然,流式最大的一个特点就是,可以定量(百分比),如果是高表达的用流式细胞仪非常有优势。
不过要注意流式多是采用激光激发,对于荧光蛋白能否检测关键是其激发波长和检测波长必须流式仪装配才行,流式仪经常配的是488nm的激光器,我室的流式还有另外一个激光器,是630nm左右,所以可以检测的荧光分子会多一些。常用的绿色荧光蛋白检测采用的是488nm激发,530nm检测。至于其它的蛋白,我尚未检测过。只要弄清楚其激发波长(excitation wave length)和检测波长(emission wave
length)即可。