细胞复苏致命失误——以Raji为例
南京金益柏细胞复苏致命失误:
其实,只要冻存工作完成的好,复苏大多没有困难,但是要有耐心。 (以Raji为例)
1. 取错细胞:
拿错冻存管。(快快快,匆忙之中,难免出错,况且-170多度,冻手!)
解决:
(1)核查记录册及冻存管上细胞的名称、时间是否一致。
(2)拿细胞时戴手套!
2. 水浴时间太长:
2min还没融化。(冻存管的壁较厚,隔热)
解决:
(1)适当提高水浴温度(37度-40度)。
(2)要是冬天,就选用保温盒。
3. 冰盒内时间太长:
细胞复苏1h后,还没有加入新的培养液。(高浓度DMSO防止胞内形成冰晶,冻存时保护细胞,但复苏融解后,浸泡时间太久会,对细胞有毒性)
解决: 提前预定超净台,减少复苏后插在冰盒里等待的时间。
4. 失去耐心:
细胞复苏三四天后,细胞没有任何动静,认为失败,倒掉所有细胞。(有些细胞复苏后一星期,才有起色)
解决: 不要换液,耐心等待,两周后再做决定。
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