非特异性背景染色经验总结
金益柏ELISA试剂盒实验中心与您分享非特异性背景染色的一点知识,包括原因及其相应处理方法:
1、操作过程中冲洗不充分---- 每步冲洗3x5分钟
2、加试剂后切片干燥---- 防止切片干燥(必要时重做)
3、组织切片折叠---- 不要在折叠处观察染色结果
4、组织中含过氧化物酶未阻断---- 配制新鲜3%双氧水封闭,孵育时间延长
5、组织中含内源性生物素---- 内源性生物素阻断试剂盒阻断
6、组织抗原弥散---- 组织及时固定,固定液要符合标准
7、切片粘附剂过厚---- 重新配制粘附涂液
8、血清蛋白封闭不充分---- 延长血清蛋白封闭时间
9、一抗浓度过高---- 参考文献并结合预实验调整合适的一抗浓度
10、DAB孵育时间过长---- 孵育至浅棕黄色即可
11、同一抗体,单抗的非特异染色要少
如有不当之处还望指出,金益柏聆听您的建议。
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