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ELISA实验误差如何操作?
作者:管理员    发布于:2017-08-16 09:37:11    文字:【】【】【
摘要:对于ELISA实验,科研人员最怕的就是有误差,我们能做的就是在可控的范围内,减少ELISA实验误差,才是实验要点。在ELISA实验操作中,误差有误差,一个个小小的误差导致最终实验存在极大的数据差距,那么如何缩小实验误差?下面随着金益柏一起来看看需要注意的:

  对于ELISA实验,科研人员最怕的就是有误差,我们能做的就是在可控的范围内,减少ELISA实验误差,才是实验要点。在ELISA实验操作中,误差有误差,一个个小小的误差导致最终实验存在极大的数据差距,那么如何缩小实验误差?下面随着金益柏一起来看看需要注意的:


ELISA实验成功与否关键在于减少实验误差



  1、科研工作者应该具备从事实验室操作的实验经验和操作经验,对于实验仪器、器械都很熟悉,而且具备总结和分析问题的能力,能够及时处理实验过程中出现的意外。


  2、使用校对过的微量移液器,排除因为设置错误导致的误差。


  3、仔细阅读elisa说明书,严格按照说明书来操作,不要混用不同批号的试剂,对于不能确定的,需要反复实验并总结进行改进。


  4、洗涤彻底,洗涤不干净,会导致假阳性,洗涤液也要新鲜,要现配,陈旧的洗涤液会出现本底增高现象,也可以出现假阳性。


  5、严格控制反应时间,反应时间比较长,酶失去活性;反应时间短的话,酶结合物不能和血清中的微生物抗原抗体充分结合,生成物机构松散不牢固,容易洗掉,都可以造成假阴性。


  6、注意试剂盒的保存期,过期的试剂盒不能使用。


  7、评估试剂的实用性,试剂是否稳定,准确率高低很重要,在试剂启用前,应该对阴、阳对照品反复对照实验,判定试剂符合要求后才能使用。


  8、严格掌握显色时间,显色时间短的话,加入终止液反应终止后,底物结合物量过少,容易出现假阴性。超过显色要求时间后显色,应判定为假阳性,这可能和试剂有关系,加显色后立即显色,不可报阳性,这可能是本底显色的结果。


  9、加样需要准确快速,如果加样不准确,酶生成的量不能确定,直接影响显色结果。显色的深浅及A值的测定与加入显色剂和终止液的量有关,所以加样应慎重。要求在一定时间内加样完毕的实验,如果加样迟缓,便出现误差,而且试剂长时间暴露在外,尤其室温过高时,保存期会缩短甚至失效。


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