注意：所有操作在冰上进行。

1.收集细胞到15ml的管中，离心。再用10-12mL PBS洗细胞
2.沉淀细胞并重悬。
3.用5mL PBS洗细胞，重复步骤2。
4.在1mL 固定溶液里彻底重悬细胞。（1×PBS；0.5% Paraformaldehyde多聚甲醛,溶液在-70℃冻存，只能冻溶一次。该步骤用于GFP样品））
5.孵育不超过60 min。
6.离心
7.用10-12mL PBS洗细胞，再用5ml洗细胞，离心
8.加300ul含8%的小牛血清重悬打匀
9.加5ml70%乙醇，逐滴加入，放-20度下午测
在FCM分析细胞周期的方法是:收集细胞,PBS洗涤,70%冰乙醇固定,加入PCB溶液室温低渗处理后,离心去上清,加入RNaseA消化后,加入PI.上流式检测.
pc缓冲液是0.2 mol Na2HPO,192 ml, 0.1mol柠檬酸8ml 0.2 M ph=7.8，用作DNA抽提缓冲液，主要是使小的DNA片断出细胞。这样会更利于检测调亡峰。

Tips：

1,过夜！－20度！几个月没问题，超过半年没试过！
2，就是PC buffer！不能代替！抽提和破膜是两个概念！抽提时间30min，有的书上要冰浴，有的不要