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血清是细胞培养中最重要的元素之一。因此,我们特别整理了一些实验室里常会遇到的问题,供大家参考:

(1) 保存血清最好的方法?

         答:我们建议血清应保存在-5℃至-2O℃。然而,若存放于4℃时,请勿超过一个月。若您一次无法用完一瓶,建议您无菌分装血清至恰当的灭菌容器内,再放回冷冻。

(2) 如何解冻血清才不会使产品质量受损?

         答:我们建议您将血清从冷冻箱取出后,先置于2~8℃冰箱使之融解,然后在室温下使之全融。但必须注意的是,融解过程中必须规则地摇晃均匀。

(3) 血清解冻后发现有絮状沉淀物出现,该如何处理?

         答:血清中沉淀物的出现有许多种原因,但最普遍的原因是由于血清中脂蛋白的变性所造成,而血纤维蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解冻后,也会存在于血清中,亦是造成沉淀物的主要原因之一。但这些絮状沉淀物,并不影响血清本身的质量。若您欲去除这些絮状沉淀物,可以将血清分装至无菌离心管内,以400g稍微离心,上清液即可接着加入培养基内一起过滤。我们不建议您以过滤的方法去除这些絮状沉淀物,因为它可能会阻塞您的过滤膜。

(4)为什么要热灭活血清?

       答:加热可以灭活补体系统。激活的补体参与溶解细胞事件,刺激平滑肌收缩,细胞和血小板释放组胺,激活淋巴细胞和巨噬细胞。在免疫学研究,培养ES细胞,昆虫细胞和平滑肌细胞时,推荐使用热灭活血清。

(5)有必要做热灭活吗?

        答:实验显示,经过正确处理的热灭活血清,对大多数的细胞而言是不需要的。经此处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进,或完全没有任何作用,甚至通常因为高温处理影响了血清的质量,而造成细胞生长速率的降低。而经过热处理的血清,沉淀物的形成会显著的增多,这些沉淀物在倒置显微镜下观察,像是“小黑点”,常常会让研究者误以为是血清遭受污染,而把血清放在37℃环境中,又会使此沉淀物更增多,使研究者误认为是微生物的分裂扩增。因此我们建议您,若非必须,您可以不需要做热处理这一步。如此一来,不但节省您宝贵的时间,更确保血清的质量!

(6) 为什么储存在冰箱中的胎牛血清会出现沉淀?

        答:GIBICO的胎牛血清 没有预老化,储存在2-8℃时,血清中的各种蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纤维蛋白原、玻粘连蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可见的混浊。这应该不会影响血清的质量。推荐在-20℃储存胎牛血清,避免反复冻融。        

(7) 如何避免沉淀物的产生?

        答:我们建议您在使用血清的时候,注意下列的操作: • 解冻血清时,请按照所建议的逐步解冻法(-20℃至4℃至室温),若血清解冻时改变的温度太大(如-20℃至37℃),实验显示非常容易产生沉淀物。• 解冻血清时,请随时将之摇晃均匀,使温度及成分均一,减少沉淀的发生。• 请勿将血清置于37℃太久。若在37℃放置太久,血清会变得混浊,同时血清中许多较不稳定的成分也会因此受到损害,而影响血清的质量。• 血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以无须做此步骤。• 若必须做血清的热灭活,请遵守56℃,30分钟的原则,并且随时摇晃均匀。温度过高,时间过久或摇晃不均匀,都会造成沉淀物的增多。

(8) Qualified和 Certified 胎牛血清 有什么差别?

         答:Certified 胎牛血清包括了Qualified胎牛血清执行的所有的标准检验程序,,除了这些标准检测,Certified胎牛血清还有一些附加的检测:最终内毒素含量的检测噬菌体检验生物化学检测激素的检测血红蛋白检测Sf9细胞生长促进及方法学检测。

(9)如何评估ES细胞合格的胎牛血清?

        答:使用D3 ES细胞。这是一个对于胎牛血清中生长促进、生长抑制和分化因子非常敏感的细胞系。相关生长效率分析:当ES细胞以非常低的密度传入包含10%胎牛血清的生长培养基中,检测启动和支持ES细胞克隆的能力。细胞毒分析:当以非常低的密度传入包含30%胎牛血清的生长培养基中,检测ES细胞和feeder细胞的生长能力。相关形态学和分化分析:检测胎牛血清支持未分化ES细胞克隆的能力。通过碱性磷酸酶活性评估分化程度。未分化的ES细胞小颜色深红粉红,分化的细胞较大,丰满,颜色较浅。所有的分析在没有ESGRO的情况下进行,培养基中出现ESGRO会掩盖由胎牛血清所导致的问题。(ESGRO或LIF经常用来保持ES细胞处于未分化状态。)培养发现大约8批血清中有1批可以用来培养ES细胞。




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